液相色譜儀操作及原理

　　液相色譜儀概述

　　液相色譜法是在經典色譜法的基礎上，引用了氣相色譜的理論，在技術上，流動相改為高壓輸送（zui高輸送壓力可達4.9107Pa）;色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成，從而使柱效大大高于經典液相色譜（每米塔板數可達幾萬或幾十萬）；同時柱后連有高靈敏度的檢測器，可對流出物進行連續檢測。

　　一、特點：

　　1．高壓：液相色譜法以液體為流動相（稱為載液），液體流經色譜柱，受到阻力較大，為了迅速地通過色譜柱，必須對載液施加高壓。一般可達150～350×105Pa。

　　2.高速：流動相在柱內的流速較經典色譜快得多，一般可達1～10ml/min。液相色譜法所需的分析時間較之經典液相色譜法少得多，一般少于1h。3.：近來研究出許多新型固定相，使分離效率大大提高。

　　4.高靈敏度：液相色譜已廣泛采用高靈敏度的檢測器，進一步提高了分析的靈敏度。如熒光檢測器靈敏度可達10-11g。另外，用樣量小，一般幾個微升。

　　5.適應范圍寬：氣相色譜法與液相色譜法的比較：氣相色譜法雖具有分離能力好，靈敏度高，分析速度快，操作方便等優點，但是受技術條件的限制，沸點太高的物質或熱穩定性差的物質都難于應用氣相色譜法進行分析。而液相色譜法，只要求試樣能制成溶液，而不需要氣化，因此不受試樣揮發性的限制。對于高沸點、熱穩定性差、相對分子量大（大于400以上）的有機物（這些物質幾乎占有機物總數的75%～80%）原則上都可應用液相色譜法來進行分離、分析。據統計，在已知化合物中，能用氣相色譜分析的約占20%，而能用液相色譜分析的約占70～80%。

　　二、性質及原理：液相色譜按其固定相的性質可分為凝膠色譜、疏水性液相色譜、反相液相色譜、離子交換液相色譜、親和液相色譜以及聚焦液相色譜等類型。用不同類型的液相色譜分離或分析各種化合物的原理基本上與相對應的普通液相層析的原理相似。其不同之處是液相色譜靈敏、快速、分辨率高、重復性好，且須在色譜儀中進行。

　　液相色譜儀操作及原理

　　液相色譜儀伴隨分析測定的需求功能不斷提升，與經典液相色譜柱裝置相比擁有了更智慧化的操作系統，穩定性能提升，靈敏度、可靠性能加強，用于食品檢測、化工分析、環境監測、藥物分析等多領域。

　　一、液相色譜儀運行原理簡述

　　可將“液”“固”兩種狀態下的液體混合物進行先分離后鑒定的儀器。

　　注：此先分離后鑒定的方法適用于“液-液色譜（LLC）”及“液-固色譜（LSC）”兩種狀態混合物。

　　液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣系統、溫度控制系統、色譜柱、檢測器、信號記錄系統等部分組成。另外，科捷儀器液相色譜儀配套產品有六通進樣閥、自動進樣器、超聲波清洗器、色譜柱溫箱、在線脫氣機、溶劑過濾器、真空泵、液相色譜柱等。

　　二、液相色譜儀操作五步驟

　　1、準備

　　1.1.準備所需流動相，用合適的0.45濾膜過濾，超聲脫氣20min。

　　1.2.根據待測樣品的需要更換合適的色譜柱（注意方向）和定量環。

　　1.3.配制樣品的標準溶液，用合適的0.45um濾膜過濾

　　1.4.檢查儀器各部件是否連接正常，其中包括電源線、數據線、地線以及輸液管道

　　2、開機

　　2.1.接通電源，一次打開檢測器、輸液泵，待檢測器自檢結束，顯示測量狀態時再打開電腦、打印機及電腦顯示器等。

　　2.2.更換流動相并排氣泡。

　　2.3.將管路的不銹鋼過濾頭放入裝有準備好的流動相儲液瓶中

　　2.4.逆時針轉動泵的排空閥，約半圈，之后擰松排空閥

　　2.5.按輸送泵（purge）鍵，綠燈亮時開始以5.0ml/min流速沖洗約2分鐘，管路無氣泡時按下（stop）鍵，重新設定流速值。

　　3、設計參數

　　3.1.流速設定

　　3.2.波長設定

　　3.3.設定完成按運行（run）按鍵

　　3.4.色譜工作站操作：依次執行→打開“在線工作站”→“通道1”→“OK”→“數據采集”后進行零點校正、查看基線，確定基線穩定后關閉查看基線可以進樣。

　　進樣后進行采集、預覽、查看結果、打印

　　4、進樣

　　4.1.進樣前將（A/Z）檢測器按鍵調零查看基數是否在0mv，有偏差則（零點校正）按鍵進行調試

　　4.2.用樣品清洗注射器、排除氣泡、抽取適量后將手動進樣閥桿調到（Load）位置，樣品注入進樣閥后調到（Inject）位置，以此進樣操作步驟完成，進入在線工作站自動采集數據流程。

　　5、系統清洗

　　由于分析樣品時流動相系統中含有緩沖鹽類物質，需使用10%甲醇水溶液，以1.0ml/min沖洗40分鐘后更換甲醇試劑，以同樣1.0ml/min沖洗40分鐘，（stop）按鍵停泵，關機。

　　三、液相色譜儀工作原理

　　首先，流動相被高壓泵打入系統，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱（固定相）內。由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數，在兩相中作相對運動時，經過反復多次的吸附-解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數據以圖譜形式打印出來。高效液相色譜儀主要有進樣系統、輸液系統、分離系統、檢測系統和數據處理系統。液相色譜儀也常以吸附柱色譜法、分配柱色譜法、離子交換柱色譜法、凝膠柱色譜法，四類根據工作原理命名的色譜法來區分。

責任編輯：YYX